આનુવંશિક અભ્યાસ હાથ ધરવાની પ્રક્રિયામાં, અમે ઘણીવાર અપૂરતા આરએનએ નમૂનાઓનો સામનો કરીએ છીએ, ઉદાહરણ તરીકે, નાના શરીરરચનાત્મક મૌખિક ગાંઠોનો અભ્યાસ કરવા માટે, એકલ-કોષના નમૂનાઓ અને ચોક્કસ જનીન પરિવર્તનના નમૂનાઓ કે જે માનવ કોશિકાઓમાં ખૂબ જ નીચા સ્તરે લખાયેલ છે.અલબત્ત, કોવિડ-19 ટેસ્ટ માટે, જો સ્વેબ યોગ્ય જગ્યાએ ન હોય અથવા સેમ્પલિંગ દરમિયાન પૂરતો સમય ન હોય, તો સેમ્પલનું કદ ઘણું ઓછું હશે, જેના કારણે બે દિવસ પહેલા આરોગ્ય અને કુટુંબ નિયોજન કમિશન બહાર આવ્યું હતું અને પરીક્ષણ પાસ કર્યું છે, અને જો ન્યુક્લીક એસિડ સેમ્પલરે છ સેમ્પલ લીધા નથી, તો તમે તેની જાણ કરી શકો છો.
રીએજન્ટની સંવેદનશીલતા મહત્વપૂર્ણ છે કારણ કે આપણને આ સમસ્યા છે કે તે સમસ્યા છે, તો RT-PCR ની સંવેદનશીલતાને સુધારવા માટે આપણે શું કરી શકીએ?
સંભવિત ઉકેલોની ચર્ચા કરતાં પહેલાં, ચાલો આપણે હમણાં જ ઉલ્લેખિત પરિસ્થિતિ સાથેની બે મોટી ગૂંચવણોનો ઉલ્લેખ કરીએ.
સૌ પ્રથમ, જ્યારે આપણા નમૂનામાં માત્ર થોડાક કોષોની વસ્તી હોય ત્યારે આપણે આરએનએના નુકશાનની ચિંતા કરીએ છીએ.જો પરંપરાગત વિભાજન અને સફાઈ પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, જેમ કે કૉલમ પદ્ધતિ અથવા ન્યુક્લીક એસિડ અવક્ષેપ પદ્ધતિ, તો થોડા નમૂનાઓ ખોવાઈ જવાની ઉચ્ચ સંભાવના છે.એક ઉકેલ એ છે કે વાહક પરમાણુ ઉમેરવું, જેમ કે tRNA, પરંતુ તેમ છતાં, અમારો પુનઃપ્રાપ્તિ પ્રયોગ બરાબર છે તેની કોઈ ગેરેંટી નથી.
તેથી વધુ સારી રીત શું છે?સંસ્કારી કોષો અથવા માઇક્રોએનાટોમિકલ નમૂનાઓ માટે એક સારો વિકલ્પ ડાયરેક્ટ લિસિસનો ઉપયોગ કરવાનો છે.
કોશિકાઓને 5 મિનિટ માટે વિભાજિત કરવાનો, RNAને ઉકેલમાં છોડવાનો, પછી 2 મિનિટ માટે પ્રતિક્રિયા બંધ કરવાનો, પછી lysateને રિવર્સ ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન રિએક્શનમાં સીધો ઉમેરો જેથી કરીને કોઈ RNA નષ્ટ ન થાય, અને અંતે પરિણામી cDNA સીધું મૂકો. રીઅલ-ટાઇમ પ્રતિક્રિયામાં.
પરંતુ શું જો, મર્યાદિત પ્રારંભિક બિંદુ અથવા લક્ષ્ય જનીન અભિવ્યક્તિની થોડી માત્રાને કારણે, આપણે બધા આરએનએને રિસાયકલ કરી શકીએ અને હજુ પણ સારા રીઅલ-ટાઇમ સિગ્નલ મેળવવા માટે પૂરતા નમૂનાઓ પ્રદાન ન કરી શકીએ?
આ કિસ્સામાં, પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન પગલું ખૂબ ઉપયોગી થઈ શકે છે.
રિવર્સ ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પછી સંવેદનશીલતા વધારવા માટેની સ્કીમ નીચે મુજબ છે.શરૂ કરતા પહેલા, અમારે ડાઉનસ્ટ્રીમને પૂછવાની જરૂર છે કે અમને કયા લક્ષ્યોમાં રસ છે, જેથી પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન માટે આ લક્ષ્યો માટે ચોક્કસ પ્રાઇમર્સ ડિઝાઇન કરી શકાય.
100 જોડી પ્રાઈમર અને 10 થી 14 વખત પ્રતિક્રિયા ચક્ર સાથે મિશ્ર પ્રાઈમર બનાવીને આ પ્રાપ્ત કરી શકાય છે.તેથી, મેળવેલ સીડીએનએને પ્રી-એમ્પ્લીફાય કરવા માટે ખાસ કરીને આ જરૂરિયાત માટે રચાયેલ માસ્ટર મિક્સ જરૂરી છે.
10 અને 14 ની વચ્ચે ચક્રોની સંખ્યા સેટ કરવાનું કારણ એ છે કે આ મર્યાદિત સંખ્યામાં ચક્રો વિવિધ લક્ષ્યો વચ્ચે રેન્ડમનેસ સુનિશ્ચિત કરે છે, જે સંશોધકો માટે નિર્ણાયક છે જેમને માત્રાત્મક પરમાણુ માહિતીની જરૂર હોય છે.
પ્રી-એમ્પ્લીફિકેશન પછી, અમે મોટી માત્રામાં cDNA મેળવી શકીએ છીએ, જેથી બેક-એન્ડ પર તપાસ સંવેદનશીલતામાં ઘણો સુધારો થાય છે, અને અમે નમૂનાને પાતળું પણ કરી શકીએ છીએ અને સંભવિત રેન્ડમ ભૂલોને દૂર કરવા માટે બહુવિધ રીઅલ-ટાઇમ PCR પ્રતિક્રિયાઓ કરી શકીએ છીએ.
પોસ્ટ સમય: એપ્રિલ-11-2023